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TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)

更新日期▩•↟:2021-07-27

訪問量▩•↟:536

廠商性質▩•↟:生產廠家

所在城市▩•↟:上海市

簡要描述▩•↟:
細胞凋亡時◕✘·▩₪,部分DNA內切酶會被啟用◕✘·▩₪,進而切斷基因組DNA↟◕·。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細胞凋亡檢測試劑盒可以用來檢測組織細胞在凋亡晚期過程中細胞核DNA的斷裂情況↟◕·。
品牌自營品牌供貨週期現貨
應用領域醫療衛生,生物產業

其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下◕✘·▩₪,在基因組DNA斷裂時暴露出的3´-羥基(3´-OH)末端摻入生物素(Biotin)標誌的dUTP◕✘·▩₪,隨後透過Biotin與連線辣根過氧化酶的鏈黴親和素(Streptavidin-HRP)特異結合◕✘·▩₪,在辣根過氧化酶底物二氨基聯苯胺(DAB)的存在下◕✘·▩₪,產生深棕色的不溶物◕✘·▩₪,從而特異準確地定位凋亡的細胞↟◕·。

本試劑盒可用於石蠟切片▩•▩✘•、冰凍切片和細胞樣本(細胞塗片或爬片)的凋亡原位檢測◕✘·▩₪,檢測結果可在普通光學顯微鏡下直接觀察計數↟◕·。
包裝清單▩•↟:

產品編號產品名稱包裝1包裝2
SJ1271
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)20T50T
說明書一份



產品組成▩•↟:

編號

組分

20T

50T

儲存條件

試劑(A)

50× Proteinase K

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(B)

10 × DNase I Buffer

100 ul

500 ul

-20℃

試劑(C)

DNase I

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(D)

Equilibration Buffer

2 ml

10 ml

-20℃

試劑(E)

5×TdT Enzyme Buffer

200 ul

1 ml

-20℃

試劑(F)

Recombinant TdT Enzyme

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(G)

Biotin-11-dUTP

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(H)

dATP

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(I

Streptavidin-HRP

20 ul

100 ul

4℃

試劑(J

DAB-A solution

1 ml

5 ml

-20℃

試劑(K

DAB-B solution

50 ul

250 ul

-20℃


儲存條件▩•↟:

Streptavidin-HRP, 4℃, 其餘試劑-20 ℃儲存◕✘·▩₪,一年有效↟◕·。

操作步驟▩•↟:

1▩•▩✘•、樣本處理▩•↟:

a) 石蠟切片▩•↟:經二甲笨▩•▩✘•、酒精脫蠟◕✘·▩₪,覆水↟◕·。脫蠟應充分↟◕·。

b) 冰凍切片▩•↟:流水沖洗◕✘·▩₪,去除OCT包埋膠後◕✘·▩₪,用純水洗3次↟◕·。

c) 細胞飛片▩•↟:用組織固定液固定後◕✘·▩₪,用PBS洗三次◕✘·▩₪,每次5分鐘↟◕·。1% Triton X-100處理10分鐘◕✘·▩₪,用PBS洗三次◕✘·▩₪,每次5分鐘↟◕·。

2▩•▩✘•、蛋白酶消化

將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋於50ul PBS中◕✘·▩₪,滴加到組織上◕✘·▩₪,37℃孵育10-20分鐘↟◕·。消化結束後◕✘·▩₪,用PBS洗三次◕✘·▩₪,每次5分鐘↟◕·。

3▩•▩✘•、封閉

用3%的雙氧水(H2O2)室溫封閉10分鐘◕✘·▩₪,封閉結束後用PBS洗三次◕✘·▩₪,每次5分鐘↟◕·。

4▩•▩✘•、陽性對照組織的處理

將組織用DNase I消化◕✘·▩₪,以獲得斷裂的DNA◕✘·▩₪,即成Tunel染色陽性的對照↟◕·。陽性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片↟◕·。

純水

46 ul

試劑(B): 10 × DNase I Buffer

5 ul

試劑(C): DNase I

1 ul

共計

50 ul

50 ul DNase I消化液滴加於組織上◕✘·▩₪,37℃孵育10-30分鐘◕✘·▩₪,消化結束後◕✘·▩₪,用PBS洗三次◕✘·▩₪,每次5分鐘↟◕·。

5▩•▩✘•、連線:

連線反應前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘↟◕·。孵育過程中按下表配製連線工作液↟◕·。去除標本上的Equilibration Buffer後◕✘·▩₪,直接滴加50ul 連線工作液◕✘·▩₪,37℃孵育1-2小時◕✘·▩₪,染色結束後◕✘·▩₪,用PBS洗三次◕✘·▩₪,每次5分鐘↟◕·。

試劑(D)Equilibration   Buffer

37 ul

試劑(E)5×TdT Enzyme   Buffer

10 ul

試劑(F)Recombinant   TdT Enzyme

1 ul

試劑(G)Biotin-11-dUTP

1 ul

試劑(H)dATP

1 ul

共計

50 ul

6▩•▩✘•、標誌

取1 ul 試劑(I)Streptavidin-HRP加入到50ul PBS 中◕✘·▩₪,混勻後滴加至組織上◕✘·▩₪,37℃避光孵育30分鐘◕✘·▩₪,隨後用PBS洗三次◕✘·▩₪,每次5分鐘↟◕·。

7▩•▩✘•、顯色

取50 ul 試劑(J)DAB-A solution 與2.5 ul 試劑(K)DAB-B solution混勻後◕✘·▩₪,滴加至組織上◕✘·▩₪,室溫顯色反應30秒至5分鐘↟◕·。顯色結束後◕✘·▩₪,用PBS洗三次◕✘·▩₪,每次5分鐘

8▩•▩✘•、蘇木素復染

每組織上滴加數滴Mayer’s蘇木素染色液◕✘·▩₪,染色1-5分鐘◕✘·▩₪,隨後用自來水沖洗反藍◕✘·▩₪,如蘇木素染色過深◕✘·▩₪,可用1%鹽酸酒精溶液分化數秒◕✘·▩₪,再次反藍;如蘇木素染色過淺◕✘·▩₪,可用蘇木素再次染色◕✘·▩₪,並延長染色時間↟◕·。

9▩•▩✘•、封片觀察

經梯度酒精脫水◕✘·▩₪,二甲苯透明後◕✘·▩₪,滴加中性樹膠◕✘·▩₪,加蓋玻片封片◕✘·▩₪,光學顯微鏡下觀察拍照↟◕·。

注意事項▩•↟:

1▩•▩✘•、Proteinase K 消化時間需要摸索◕✘·▩₪,冰凍切片 10 min 左右◕✘·▩₪,石蠟切片時間應適當延長↟◕·。

2▩•▩✘•、陰性對照體系▩•↟:配製連線工作液時用純水替代TdT Enzyme↟◕·。

3▩•▩✘•、連線與標誌反應時應注意避光↟◕·。

4▩•▩✘•、實驗過程中請穿戴手套▩•▩✘•、實驗服等◕✘·▩₪,做好個人防護↟◕·。

備註▩•↟:

         產品資訊可能會有最佳化升級◕✘·▩₪,請以實際標籤資訊為準↟◕·。

本產品僅供科研使用↟◕·。請勿用於醫藥▩•▩✘•、臨床診斷或治療◕✘·▩₪,食品及化妝品等用途↟◕·。請勿存放於普通住宅區↟◕·。

為了您的安全和健康◕✘·▩₪,請在實驗過程中做好防護工作↟◕·。



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