油紅o染色液的染色步驟及其注意事項分析

　　油紅o染色液的染色步驟↟✘：
 

　　1│··✘•、先小心輕緩倒去培養夜╃│₪│。
 

　　2│··✘•、用pbs輕緩漂洗(不洗沒問題)╃│₪│。
 

　　3│··✘•、加10%中性甲醛固定30min(實際固定時間過夜都沒問題╃│₪│。固定液用95%酒精也)╃│₪│。固定的是細胞膜╃│₪│。
 

　　4│··✘•、稀釋油紅儲存液╃◕·▩╃，油紅:去離子水=3:2,濾紙過濾╃◕·▩╃，室溫放置10min(除去一些雜質╃◕·▩╃，染色結果更清晰)
 

　　5│··✘•、染色10min左右╃◕·▩╃，加的體積覆蓋住板底即可╃◕·▩╃，如6孔加1.5ml╃◕·▩╃，24孔加0.5-1ml(實際染色時間1小時都可以)╃│₪│。
 

　　6│··✘•、脫色╃◕·▩╃，用75%酒精/60%異丙醇漂洗╃◕·▩╃，除去多餘的染料(實際用其他平衡液洗也沒問題,背景並不會殘留多少)
 

　　7│··✘•、復染╃◕·▩╃，淡蘇木染色115分鐘╃◕·▩╃，pbs漂洗(這一步不做也可╃◕·▩╃，看試驗需要╃◕·▩╃，並且蘇木素會把胞漿染紅╃◕·▩╃，如要顯示核,hoechst33342也可以╃◕·▩╃，濃度5微克/毫升染10分鐘即可把核染上)╃│₪│。
 

　　8│··✘•、甘油明膠封片(封片後可長期儲存)╃│₪│。
 

　　9│··✘•、顯微鏡觀察╃│₪│。
 

　　油紅o染色液的染色注意事項↟✘：
 

　　(1)脂肪油紅染色,有的是動物/人體脂肪組織切片,或細胞爬片╃│₪│。
 

　　(2)成熟飽滿的脂肪細胞,容易破裂,脂滴洩漏,所以壓片,切片都要考慮到這個問題╃│₪│。
 

　　(3)細胞爬片細胞溶液脫落,特別是脂滴大的╃│₪│。操作務要輕柔╃│₪│。不要把細胞沖掉╃│₪│。
 

　　(4)如果做脂肪組織冰凍切片,冰凍溫度比普通要低,切片厚度加厚╃│₪│。