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油紅o染色液的染色步驟及其注意事項分析

釋出時間↟✘:2022-12-12   點選次數↟✘:75次
  油紅o染色液的染色步驟↟✘:
 
  1│··✘•、先小心輕緩倒去培養夜╃│₪│。
 
  2│··✘•、用pbs輕緩漂洗(不洗沒問題)╃│₪│。
 
  3│··✘•、加10%中性甲醛固定30min(實際固定時間過夜都沒問題╃│₪│。固定液用95%酒精也)╃│₪│。固定的是細胞膜╃│₪│。
 
  4│··✘•、稀釋油紅儲存液╃◕·▩╃,油紅:去離子水=3:2,濾紙過濾╃◕·▩╃,室溫放置10min(除去一些雜質╃◕·▩╃,染色結果更清晰)
 
  5│··✘•、染色10min左右╃◕·▩╃,加的體積覆蓋住板底即可╃◕·▩╃,如6孔加1.5ml╃◕·▩╃,24孔加0.5-1ml(實際染色時間1小時都可以)╃│₪│。
 
  6│··✘•、脫色╃◕·▩╃,用75%酒精/60%異丙醇漂洗╃◕·▩╃,除去多餘的染料(實際用其他平衡液洗也沒問題,背景並不會殘留多少)
 
  7│··✘•、復染╃◕·▩╃,淡蘇木染色115分鐘╃◕·▩╃,pbs漂洗(這一步不做也可╃◕·▩╃,看試驗需要╃◕·▩╃,並且蘇木素會把胞漿染紅╃◕·▩╃,如要顯示核,hoechst33342也可以╃◕·▩╃,濃度5微克/毫升染10分鐘即可把核染上)╃│₪│。
 
  8│··✘•、甘油明膠封片(封片後可長期儲存)╃│₪│。
 
  9│··✘•、顯微鏡觀察╃│₪│。
 
  油紅o染色液的染色注意事項↟✘:
 
  (1)脂肪油紅染色,有的是動物/人體脂肪組織切片,或細胞爬片╃│₪│。
 
  (2)成熟飽滿的脂肪細胞,容易破裂,脂滴洩漏,所以壓片,切片都要考慮到這個問題╃│₪│。
 
  (3)細胞爬片細胞溶液脫落,特別是脂滴大的╃│₪│。操作務要輕柔╃│₪│。不要把細胞沖掉╃│₪│。
 
  (4)如果做脂肪組織冰凍切片,冰凍溫度比普通要低,切片厚度加厚╃│₪│。

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